化妆品保湿化妆品功效评价方法

在给定温度和相对湿度条件下，保湿剂不断从环境中吸收水分，潮解或者形成溶液。基于化妆品中不同保湿剂分子对水分子的作用力不同，吸收水分和保持水分的能力也略有差异。通过称重法测试保湿剂的吸湿率可以表征该成分的保湿功效。

保湿剂在一定时间吸收的水分重量占该保湿剂重量的百分比，为此保湿剂在该时间内该相对湿度下的吸湿率。一般采用饱和硝酸钾溶液维持94%的相对湿度。将涂抹有受试物的玻璃板置于简易恒湿器的多孔隔板上，并保证隔板上下空气的流通，放置一段时间后（2、4、6、8h）取出、称重，计算吸湿率。

本方法适用于吸水性保湿原料或含有该类型保湿成分的保湿产品的吸湿率测定。油脂类保湿剂和水剂、乳液等含水量较高的产品不宜采用该方法。

1.2保湿性

保水率为在某一固定相对湿度的前提下，样品放置不同时间后（样品放置后的质量-样品放置前的质量）/样品放置前的质量*100%，反应产品随时间的变化所呈现的吸湿性的大小。

不同保湿剂分子对水分子的作用力不同，保持水分的能力也略有差异。试验常采用称重法测试失水率表征保湿剂的保水能力，从而表征化妆品及其原料保持水分的能力大小。采用一定体积的饱和碳酸钾溶液维持约43%的相对湿度。称取一定量受试物溶液，均匀涂覆在贴有3M胶带的玻璃板上，放置一段时间后（2、4、6、8h）称量受试物的重量，计算失水率。失水率越大表示该保湿剂的保水性越差。失水率越小表示该保湿剂的保水性越强，长期保湿效果越好。

本方法适用于吸水性保湿原料或含有该类型保湿成分的保湿产品的失水率测定，油脂类保湿剂或含水量较低的膏霜类产品不宜采用该方法。

1.3吸湿稳定性

理想的保湿剂除了能在周围环境中吸收水分，在一般湿度下保持水分外，还需要具备其吸收的水分随着相对湿度变化较小的特点。当外界相对湿度变小时，如果保湿剂的吸收水分的能力变小将会导致皮肤干燥。吸湿稳定性的测定一般称取同质量的某一固定保湿剂，将其放置在不同相对湿度的环境中，一段时间后比较其各自的吸湿量。如果不同环境中的吸湿量变化不大，表明该保湿剂的吸湿稳定性好。

1.4皮脂分析

皮脂膜是由皮肤表面的皮脂与汗液和水乳化后在皮肤表面形成的乳化皮脂薄膜，覆盖在皮肤和毛发的表面。皮脂膜像一层无形的屏障影响皮肤的健康。皮脂膜可有效滋润皮肤，使皮肤柔韧、润滑、富有光泽、防止干裂。另外，皮脂膜可防止皮肤水分过度蒸发、防止外界水分及其他物质大量进入，锁住水分，阻止营养物质、保湿因子及水分的散失，使皮肤含水量保持正常，对皮肤锁水功能起到重要的屏障功能。

皮肤表面皮脂成分含量：甘油三酯约占20-60%、蜡脂约占23-29、角鲨烯约占10-14、游离脂肪酸约占5%-40%、胆固醇及胆固醇酯约占1-5%。皮肤表面脂质受多种因素的影响，皮脂成分含量也是在一定范围内变动。通常情况下，通过分析神经酰胺、胆固醇、脂肪酸含量及其比例，分析皮脂成分是否存在偏颇，可间接反应皮脂膜的健康状态。

1.5天然保湿因子

（NaturalMoisturizingFactor，NMF）

NMF是存在于角质层内与水结合的一些低分子量物质的总称，包括氨基酸、吡咯烷酮羧酸、乳酸、尿素、尿刊酸、离子碳水化合物、氨、多态、葡糖胺及其他未知物质，是一类皮肤自身存在的、具有吸水特性的小分子复合物。与皮肤水合作用密切相关的NMF中最具代表性的为PCA、UCA、Urea，可以吸收大量的水分并保持水分不被散失。NMF作为一种低分子量水溶性的高效吸湿性分子化合物，能帮助角质细胞吸收水分，维持水合功能。

对NMF的定量测试常见的方法为：1.利用胶带剥脱，采用高效液相色谱、液相色谱质谱联用技术，对剥脱下的角质层细胞中UCA、PCA等成分进行分析，2.基于保湿的原理，从二维\三维细胞水平检测与保湿相关基因的表达情况，利用3D皮肤模型直接检测皮肤角质层中PCA、UCA、Urea的含量变化，再利用相似相容原理，采用高效液相色谱对角质层PCA、UCA、Urea进行分离和检测。

1.6皮肤屏障相关蛋白及其基因表达

人体正常的皮肤有两方面的屏障功能：一方面抵御外界各种物理、化学和生物等有害物质对皮肤的侵害，对酸、碱、有机溶剂及物理性摩擦具有一定的抵抗力；另一方面对外界物质的吸收、内部物质的流失具有明显的限制作用，可阻止体液外渗与化学物质的内渗，防止水分散失。皮肤屏障受损表观上将会导致细胞连接松散、易脱落，细胞间紧密连接能力变弱，角质细胞表面TEWL升高，皮肤保水能力下降，皮肤变的敏感、脆弱。所以，皮肤屏障功能在保持机体内环境的稳定上起着重要的作用。

皮肤屏障功能主要依靠角质层的“砖墙结构”。角质层的主要成分是角蛋白和脂质紧密有序的排列。所以，对皮肤屏障功能的检测可以通过测定相关蛋白的表达间接反应皮肤的水合力、保水力。与皮肤屏障直接相关的蛋白主要包含：角蛋白、丝聚合蛋白、外皮蛋白、兜甲蛋白、转谷氨酰胺酶、紧密连接蛋白-1等。其检测方法主要包含：定量即时聚合酶链式反应

（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）、免疫细胞化（Immunocytochemistry，ICC）/免疫荧光（Immunofluorescence，IF）、免疫组化。

1.7水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）

皮肤固有的水合能力不仅由于角质细胞中NMF的存在，还依赖于皮肤内水分的运输。AQPs是一类膜蛋白家族，可选择性地转运水和小分子溶质（如甘油）。

在人体皮肤中，AQP-3是AQPs家族表达最丰富的水通道蛋白亚型。其在表皮的表达量具有空间层次，主要表达于人表皮基底层，棘层、颗粒层，到角质层逐渐消失。AQP-3在基底膜带的高表达，可以促使水，甘油及尿素的转运，担负着角质层甘油运输的重要作用。AQP-3将内源性的甘油以及皮脂腺中的甘油三酯运输进入表皮，使其直接或间接影响皮肤保湿功效。

通过抗原抗体的特异性结合，可以用荧光基团标记出表皮细胞表达的AQP3，荧光强度即对应了该蛋白的表达量，同时，通过定量即时聚合酶链式反应测定其mRNA的表达，从而可以一定程度上反映出皮肤转运水分的能力。